动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法

动物源食品中呋喃唑酮残留检测方法 —高效液相色谱法 　　1 范围 　　本标准规定了动物源食品中呋喃唑酮残留量的检测的制样和高效液相色谱测定方法。 　　本标准适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏组织和鱼肉中呋喃唑酮残留量检测。 　　2 规范性引用文件 　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 　　GB/T1.1-20001标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则（IS0/IEC Directives，Part 3，1997，Rules for the structure and drafting of International Standards，NEQ） 　　GB/T 6682—1992 分析实验室用水规格和试验方法 　　NY/T ××××—2001 动物源食品中兽药残留检测标准编制规则 　　3 制样 　　3.1 样品的制备 　　取适量新鲜或冷冻空白或供试组织，绞碎并使均匀。 　　3.2 样品的保存 　　-20℃冰箱中贮存备用。 　　4、测定方法 　　4.1 方法提要或原理 　　组织加Cl8混匀后装柱，用正己烷冲洗，真空抽干后，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液减压浓缩至干后用流动相溶解，过氧化铝小柱后，用高效液相色谱测定。 　　4.2 试剂和材料 　　以下所用试剂，除特殊注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的二级水。 　　4.2.1 呋喃唑酮对照品 含呋喃唑酮（C8H7N3O5）不得少于99.0％。 　　4.2.2 乙腈—色谱纯 　　4.2.3 磷酸 　　4.2.4 正己烷 　　4.2.5 乙酸乙酯 　　4.2.6 甲醇 　　4.2.7 C18柱 10μm~40μm，使用前分别用二倍体积的正己烷、乙酸乙酯和甲醇依次冲洗，并抽气至干，晾干后待用。 　　4.2.8 0.015mol/L磷酸溶液 取磷酸lmL，用水稀释至1000mL。 　　4.2.9 呋喃唑酮标准溶液 称取呋喃唑酮对照品约l0mg，105℃干燥4h，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为200μg/mL的贮备液，置4℃冰箱中保存。临用前，取此储备液，用流动相稀释成浓度为0.05μg/mL～2.00μg/mL的标准工作液。 　　4.3 仪器和设备 　　4.3.1 高效液相色谱仪（配紫外检测器） 　　4.3.2 分析天平 　　4.3.3 旋转蒸发仪 　　4.3.4 旋涡混合器 　　4.3.5 真空泵 　　4.3.6 研钵 　　4.3.7 玻璃层析柱 300mm×l5mm（1d.），下端配有G4砂芯滤板。 　　4.3.8 氧化铝小柱 （制备：取中性氧化铝（100～200目）0.1g，装入内径为4mm的下端配有砂芯滤板的柱内，用前用5mL乙酸乙酯预洗，晾干后使用。） 　　4.4 测定步骤 　　4.4.1 试料的制备 　　试料的制备包括： 　　——取绞碎后的供试样品，作为供试试料。 　　——取绞碎后的空白样品，作为空白试料。 　　——取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。 　　4.4.2 提取 　　称取（2±0.05）g试料，加C18约3g（水多可适当多加），置玻璃研钵中，用研杵混匀，混匀时应保持轻微压力沿同一方向研磨，直至组织与C18成一均匀物质。将其转入玻璃层析柱中，层析柱置于抽气瓶上，用20mL正己烷冲洗层析柱，洗液弃去，用真空泵抽气至干，再用30mL乙酸乙酯洗脱（用真空泵抽气，使其流速约为2mL/min），收集洗脱液置50mL鸡心瓶中，于60oC下旋转减压蒸发至近干。 　　4.4.3 净化 　　用流动相0.5mL～1.0mL涡流振荡溶解残渣，过氧化铝小柱，收集过柱液，用0.45μm微孔滤膜过滤，收集滤液作为试样溶液，供高效液相色谱仪测定。 　　4.4.4 测定 　　4.4.5 色谱条件与系统适用性试验 　　色谱柱：C18柱，300mm×3.9mm（i.d.），粒径5μm，或相当者。 　　流动相：乙腈-0.015mol/L磷酸溶液（20+80，v/v）； 　　流速：1.0mL/min； 　　检测波长：367nm； 　　进样量20μL。 　　理论板数按呋喃唑酮峰计算，应不低于1500。 　　4.4.6 测定法 　　取适量试样溶液和相应浓度的标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样溶液中呋喃唑酮的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下，呋喃唑酮的保留时间在4.5min附近。标准品液相色谱图件附录A中图A1。 　　4.4.7 空白试验 　　除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作 　　4.4.8 结果计算和表述 　　按下式计算供试组织中呋喃唑酮的残留量： 　　ACS 　　X=——V 　　ASW 　　式中： 　　X—供试组织中呋喃唑酮的残留量（mg/kg）； 　　A—供试试料试样溶液中呋喃唑酮的峰面积： 　　AS—标准工作液中呋喃唑酮的峰面积： 　　CS—标准工作液中呋喃唑酮的浓度（μg/mL）： 　　W—供试组织样品重量（g）； 　　V—供试试料提取液浓缩近干后残余物溶解的总体积（mL） 　　注：计算结果需扣除空白值。 　　5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 　　5.1 灵敏度 　　本方法在鸡的肌肉组织中的检测限为l0μg/kg，在肝脏、肾脏组织中的检测限为50μg/ks；在鱼肉组织中的检测限为25μg/kg。 　　5.2 回收率 　　本方法在鸡的肌肉组织中回收率为80%～110%、肝脏组织中回收率为60%～130%、肾脏组织中回收率为50%～140%；在鱼肉组织中回收率为70%～120%。 　　5.3 精密度 　　本方法的批内变异系数CV≤10%，批间变异系数CV≤25%。