【博览会专题报告】马祥：非洲猪瘟荧光定量PCR现场应用探讨

为了帮助猪场、企业有效开展非洲猪瘟检测工作，6月16日下午，第四十七届养猪产业博览会（广州）特别举办“非洲猪瘟检测论坛”，其中，北京爱德士元亨生物科技有限公司大中华区重点客户总监马祥带来《非洲猪瘟荧光定量PCR现场应用探讨》。

北京爱德士元亨生物科技有限公司大中华区重点客户总监马祥

马祥表示，ASF的传播很重要的一点是，猪感染ASFV后猪与猪之间接触传播的速度较其他一些疾病要慢。如果一组中只有一头或两头猪感染了这种病毒，那么最初的死亡可能只涉及那一两头猪，直到ASF病毒传播给到更多的猪只，这可能需要一到两周时间，之后死亡率就会增加。这种缓慢的传播与有限的气溶胶传播有关，猪只在临床症状出现之前还没开始排毒，感染猪的排泄物和分泌物中的病毒含量相对较低。值得注意的是，感染猪的血液和组织中的病毒含量非常高，因此在场内不建议对疑似及感染猪只进行解剖处理。

马祥指出，更为敏感的荧光定量PCR方法是监测ASF的最好选择。早期、快速诊断和及时采取措施可以最大程度的控制疾病和减少经济损失。其中，使用经过科学验证的成熟的方法及产品技术非常重要。假阴性，导致致命的延误诊断；假阳性，导致错误的处理方案，交易受阻。选择诊断工具应视检测的目的而行，评估检测方法及产品应注重敏感性与特异性，重复性及稳定性。

具体检测采样方法如下：

1.棉拭子：预装生理盐水或PBS或纯水2mL/管于5mL离心管（混样检测预装4mL/管于10mL离心管），合盖备用。采样前取出医用棉拭子在离心管中充分湿润，于管壁挤出多余水分（无水滴滴落）后擦拭采样点或采样区域，完成后放回离心管，折断多余部分，将棉签头留置管中，合盖并标记编号送检。

2.血样：采用预置EDTA抗凝剂的离心管。酒精棉擦拭消毒耳缘采血区域，一次性采血针刺破并挤压出少量血液，一次性滴管吸取后吹出于离心管中，合盖并标记编号送检。

3.唾液：唾液采集袋或棉绳悬挂于栏舍内或定位栏前，猪只充分咀嚼，置于密封袋或胶袋内，剪去袋子一角后挤压棉块或棉绳，将收集的唾液滴至离心管中，合盖并标记编号送检。

他也总结了RealPCR* ASFV性能：RealPCR* ASFV产品能够覆盖非洲猪瘟病毒24个p72基因型，最低检出限可低至10拷贝/反应，RT-PCR扩增效率100.6%，诊断敏感性总体上高于UPL-PCR和OIE-PCR，经OIE参考实验室验证可检测多达20份样品混样，与其他病源无交叉且诊断特异性可达100%（n=227）， 重复性%CV<2%， 可操作性%CV<5.5%， 产品的稳定性可达14-18月，容忍度测试满足最低检出限要求。

他指出，IDEXX RealPCR平台具有这几大优势：1.试剂组成灵活、方便库存管理同时减少试剂污染风险；2.统一扩增程序实现高通量检测；3.内参/内部阳性对照质控，避免检测结果的假阴性（这点对于ASF的诊断尤其重要）；4.完善的实验室污染监控系统，及时发现污染源，避免假阳性结果。

小结：

1.确定监测/检测目的；

2.根据检测目的进行自身评估；

3.选择样品，根据不同的样品选择采样及处理方案；

4.选择成熟的商品化检测试剂：方法的敏感性、特异性、稳定性、配套试剂……

5.专业的实验操作人员；

6.实验室定期进行环境污染监控评估，处理；

关键因素：生物安全措施+精准监测方案（检测试剂+处理方案）。

最关键点：人员的执行到位。

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